Туберкулез — распространенное социально зависимое инфекционное заболевание, при котором могут быть поражены любые органы и ткани человеческого тела. Образно говорят, что болезнь щадит только волосы и ногти, как сказал президент Российского общества фтизиатров, профессор, академик РАМН М. И. Перельман.
24 марта 1882 г. германский бактериолог Р. Кох на заседании Фтизиологического общества в Берлине сделал доклад «Этиология туберкулеза», в котором представил убедительные данные об открытии им возбудителя этой болезни. Открытию предшествовало 17 лет упорной работы в лаборатории. За это открытие Р. Кох был удостоен Нобелевской премии, которая была присуждена ему в 1905 году. 24 марта официально объявлено Всемирным днем борьбы с туберкулезом.
Исторической вехой стало открытие в 1895 году В. Рентгеном X-лучей.
После доклада Р. Коха и открытия В. Рентгена было предложено много вариантов установления диагноза «туберкулез». Коротко остановлюсь только на бактериологических и молекулярно-генетических методах исследования. Они имеют свои положительные и отрицательные стороны.
Отмечена определенная закономерность: чем проще и дешевле метод (микроскопия), тем менее это метод чувствителен. А классический культуральный метод для получения ответа требует иногда до трех месяцев инкубирования, определение же лекарственной устойчивости и идентифицирование увеличивает срок исследования еще на четыре недели. Таким образом, возникла острая необходимость создания высокочувствительных и одновременно быстро осуществляемых методов исследования диагностического материала.
На сегодняшний день одним из самых перспективных методов выявления туберкулеза бактериологическим методом является посев диагностического материала на жидкие питательные среды с использованием системы BACTEC. Наиболее чувствительным и специфичным методом исследования, позволяющим к тому же получить достоверный результат в течение одного — двух дней, является метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Метод относительно новый. Первая публикация, в которой описан метод ПЦР, была в 1985 году — Kary Mullis с соавторами. Ему же в 1993 году присуждена Нобелевская премия в области химии. В 1992 году была первая публикация, в которой рассказано об использовании метода ПЦР в реальном времени (Higuchi с соавторами).
ПЦР — метод, позволяющий многократно увеличивать количество специфичного для того или иного инфекционного агента фрагмента молекулы ДНК. Областью применения является не только диагностика инфекционных заболеваний, но и диагностика онкологических заболеваний, генетических заболеваний, идентификация личности, диагностика патогенных агентов в пище и другие.
Особенно актуальным представляется использование этого метода во фтизиатрической практике. Метод позволяет не только получить результат выявления специфического фрагмента ДНК возбудителя в течение одного — двух дней (вместо четырёх — двенадцати недель при традиционных культуральных методах исследования), но и достаточно быстро получить результаты определения лекарственной устойчивости к некоторым противотуберкулезным препаратам I и II ряда (один-два дня вместо четырех недель при традиционных методах исследования). Кроме того, коммерческие наборы для исследования диагностического материала методом ПЦР в реальном времени позволяют не только осуществить дифференциальную диагностику видов микобактерий, входящих в M. tuberculosis complex, но и определить генотип Beijing.
Диагностическим материалом, подлежащим исследованию, могут служить клинические образцы (мокрота, промывные воды бронхов и желудка, спинномозговая жидкость, экссудат, пунктат, биоптат, моча, отделяемое половых путей); деконтаминированные осадки; культуры микобактерий.
Аппаратурное обеспечение совершенствуется прогрессирующими темпами. Поступившее коммерческое предложение, в случае его реализации, позволит значительно уменьшить ручную работу и увеличить в несколько раз число исследуемых образцов диагностического материала. Принцип выделения ДНК, даже при использовании различных диагностических наборов, один. Существенно отличаются анализаторы. На сегодняшний день в России наиболее востребованы АНК-32, Rotor-Gene Q, GeneXpert DX.
На базе бактериологической лаборатории ГБУЗ «Брянский областной противотуберкулёзный диспансер» больше года функционирует ПЦР-лаборатория в реальном времени для диагностики ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (анализатор Rotor-Gene Q).
Сама по себе констатация факта наличия или отсутствия ДНК, хоть и имеет диагностическое значение, но требует для определения эффективности данного анализа сопоставления с традиционными методами исследования. Эта работа была осуществлена (сравнивались результаты исследования одного и того же вида диагностического материала, полученного от одного и того же больного с разницей не более одной недели).
Всего было исследовано 440 образцов диагностического материала, из них подверглись анализу 379 (остальные по разным причинам выбраковывались). Положительных результатов оказалось 144 (38,0 процента). Из них ПЦР была эффективна в 75,7 процента; посев в 30,6 процента; люминесцентная микроскопия в 29,2 процента. Часто положительные результаты обнаруживались одновременно несколькими методами.
На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что метод ПЦР в реальном времени оказался наиболее эффективным (выявляемость этим методом превосходила выявляемость культуральным методом более чем в два раза).
Менее чем за половину 2014 года сделано более пятисот исследований. Все они продолжают анализироваться. В целом эффективность ПЦР исследования продолжает оставаться более высокой, чем эффективность традиционных методов.
